酶聯(lián)免疫試劑盒競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定小分子藥物時(shí)的酶標(biāo)記物


隨著政府對(duì)食品安全的檢測(cè)額重視程度,越來(lái)越多的藥物殘留小分子檢測(cè)試劑盒出現(xiàn),酶聯(lián)免疫試劑盒競(jìng)爭(zhēng)法試劑盒是其中的主力軍,在采用酶聯(lián)免疫競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)小分子藥物的模式中常用的方法有:
1. 包被抗原,酶標(biāo)二抗進(jìn)行的間接競(jìng)爭(zhēng)法,該方法的好處在于對(duì)*抗體不存在操作影響(沒(méi)有認(rèn)為的進(jìn)行標(biāo)記或其他處理),一抗活性好,并且抗原的包被一般不會(huì)出現(xiàn)過(guò)量包被造成IC50值較高,靈敏度降低的情況!但是該方法需要進(jìn)行兩次洗板操作過(guò)程麻煩,并且陰性O(shè)D值一半不會(huì)很高,多在2.0以下!線(xiàn)型范圍較小,度較低!
2. 包被抗原,酶標(biāo)一抗進(jìn)行的標(biāo)記抗體直接競(jìng)爭(zhēng)法,該方法的好處在于操作簡(jiǎn)單,一步完成,包被一般不會(huì)出現(xiàn)過(guò)量包被造成IC50值較高,并且游離的抗原更容易和標(biāo)記的抗體進(jìn)行反應(yīng),靈敏度和度較高,陰性顯色多在3.0以上。但是對(duì)于一抗進(jìn)行標(biāo)記難度較大,標(biāo)記和后期純化需要花費(fèi)功夫!
3. 包被抗體,標(biāo)記抗原進(jìn)行的標(biāo)記抗原直接競(jìng)爭(zhēng)法,該方法的好處在于操作簡(jiǎn)單,一步完成,由于標(biāo)記的抗原帶有HRP相對(duì)游離的抗原與包被的抗體更容易結(jié)合,并且小分子標(biāo)記后容易純化分離,沒(méi)有偶聯(lián)的小分子通過(guò)透析即可除去,并且包被一抗對(duì)抗體的活性沒(méi)有明顯影響!但是該方法采用包被抗體的方法很容易造成包被過(guò)量影響IC50值,并且小分子的標(biāo)記通常不能采用經(jīng)典的過(guò)碘酸鈉法,需要采用其他的化學(xué)方法,EDC。NHSEDC等,對(duì)酶的活性有一定的影響。
個(gè)人通過(guò)近期一些實(shí)驗(yàn)證明,直接競(jìng)爭(zhēng)法IC50和線(xiàn)型范圍明顯優(yōu)于間接競(jìng)爭(zhēng)法,標(biāo)記抗原和標(biāo)記抗體相對(duì)來(lái)說(shuō)標(biāo)記抗原要稍好一些,關(guān)鍵在于后期純化方便!拋磚引玉?。。∠M蠹夷軌蜥槍?duì)此問(wèn)題進(jìn)行專(zhuān)題討論!重點(diǎn)在于抗原抗體的標(biāo)記,以及抗原的合成改造!